대장균 O157:H7에 특이적으로 결합하는 단일가닥 DNA 압타머 및 그 제조방법이 개시된다. 압타머의 제조방법은 SELEX 및 카운터 SELEX 과정을 포함하며, 상기 SELEX 과정은, 양 끝에 PCR용 프라이머 영역을 가지며 중앙에 무작위로 배열된 40개의 염기를 가지는 DNA들을 포함하는 DNA 라이브러리와 대장균 O157:H7을 결합버퍼 용액에 혼합하여 대장균 O157:H7-DNA 결합체를 유도하는 단계(S1); 상기 DNA 라이브러리와 대장균 O157:H7의 혼합용액을 원심분리하여 상기 대장균 O157:H7-DNA 결합체를 추출하는 단계(S2); 상기 살모넬라-DNA 결합체로부터 DNA를 분리하는 단계(S3); 및 상기 분리된 DNA를 중합효소 연쇄반응을 통해 증폭시키는 단계(S4); 를 포함하고, 상기 카운터 SELEX 과정은, 상기 증폭된 DNA와 비-표적 미생물을 결합 버퍼 용액에 혼합하여 비-표적 미생물-DNA 결합체를 유도하는 단계(S5); 및 상기 농축된 DNA와 비-표적 미생물의 혼합용액을 원심분리하여 상기 비-표적 미생물과 결합하지 않은 DNA를 추출하는 단계(S6)를 포함하며, 상기 SELEX 과정의 5회 반복 실시 후 카운터 SELEX 과정의 1회 실시되고, 다시 SELEX 과정과 카운터 SELEX 과정의 교번 실시를 2회 반복하는 것을 특징으로 한다.