본 발명은 단백질 내의 앰버 코돈(amber codon) 위치에 4-아지도-L-페닐알라닌(4-azido-L-phenylalanine)을 결합시킬 수 있는 재조합 티로실-tRNA 합성효소(tyrosyl-tRNA synthetase)를 설계하여, 합성된 유전자 DNA를 이용한 4-아지도-L-페닐알라닌이 포함된 단백질을 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 얻어진 새로운 재조합 티로실-tRNA 합성효소 CHI 및 JNCC는 기존의 돌연변이 티로실-tRNA 합성효소와는 달리 단백질 구조 정보로부터 새로운 티로실-tRNA 합성효소 CHI 및 JNCC를 설계하여 얻어진 아미노산 서열과 이를 대장균에서 최적 발현시키기 위하여 코돈이 최적화된 염기서열을 가지고 있다. 본 발명에서 얻어진 재조합 티로실-tRNA 합성효소 CHI 및 JNCC를 향후 다양한 비천연 아미노산의 결합과 앰버 서프레션 활성의 개량에 이용할 수 있을 것으로 판단된다.